技术文章您的位置:网站首页 >技术文章>分光光度计如何检测核酸蛋白?
分光光度计如何检测核酸蛋白?
发布时间:2019-08-27   点击次数:504次
 
  *,分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计的简单原理:分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
  核酸的定量是分光光度计使用频率较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
  事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和度。如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。  
上海临准机电设备有限公司主营产品:手持式频闪仪,手持红外测温仪,热指数监测仪,轴承状态检测仪
网站首页 关于我们 新闻中心 产品中心 联系我们   沪ICP备16009343号-2   GoogleSitemap   

在线客服
电话
021-51601718
手机
15021090490

化工仪器网

推荐收藏该企业网站
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站